PERFIL HEMATOLÓGICO DE OVINOS DOADORES DE SANGUE DO CENTRO DE CRIAÇÃO DE ANIMAIS DE LABORATÓRIO (CECAL), FIOCRUZ, RJ

INTRODUÇÃO

 O Centro de Criação de animais de Laboratório (CECAL), Unidade técnica de apoio da FIOCRUZ, assume o seu papel estratégico como Unidade do governo na área da saúde pública e bem-estar social, ao produzir anualmente 300 litros de sangue coletados das diversas espécies de animais de laboratório, com o objetivo de atender a demanda das diversas unidades da FIOCRUZ, visando a realização de pesquisa básica e aplicada, bem como alimentação de insetos, produção de meio de cultura e na utilização de estudo dos seus elementos figurados¹. Dentro deste contexto cerca de 60% do sangue produzido, é coletado de ovinos criados e mantidos no CECAL. São realizadas sangrias periódicas para atender a demanda dos Usuários de sangue de ovino (Pesquisadores, laboratórios, hospitais, Centros de Pesquisa, etc.)^1,2. Assim os estudos voltados aos constituintes sanguíneos de ovinos, seja para avaliar a qualidade sanitária do rebanho, o estado clínico individual de cada animal, o bem-estar e o uso adequado dos animais e inclusive os fatores que interferem no hemograma completo, são fundamentais na prática laboratorial da Medicina Veterinária, pois seus resultados podem servir de parâmetros referenciais sempre necessários para se estabelecer diagnósticos das principais doenças que acometem o rebanho, principalmente as anemias e processos toxi-infecciosos^3,4,5. Atualmente a Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ) é uma Instituição que utiliza sangue de animais de laboratório convencionais e não convencionais, em diversas áreas da pesquisa científica não apenas no seu campus, mas também em suas unidades em outros estados do Brasil. O Sangue destes animais é coletado no Pavilhão de Animais de Médio e Grande Porte (PAMGP) setor do Departamento de Produção Animal do CECAL que cria e mantém estes ovinos^1,2,. O Sangue é fornecido do tipo desfibrinado, Sangue total, Sangue Citratado, Sangue em solução de Alséver, Sangue Heparinizado e Sangue com EDTA. São ainda fornecidos hemoderivados como soro e plasma^1,2. Por ser o sangue de maior fornecimento é comum a monitoração do padrão sanitário tanto dos animais como de todo processo de esterilização do material utilizado. O objetivo deste trabalho foi verificar o perfil hematológico dos animais pré e pós-sangria com a finalidade de estabelecer e comparar os valores hematológicos dos ovinos do PAMGP, com os valores encontrados na literatura, bem como verificar se o procedimento de sangria interfere ou não no perfil hematológico destes animais ocasionando comprometimento clínico da saúde dos animais.

MATERIAL E MÉTODOS

 O Procedimento de sangria foi realizado uma vez por semana de acordo com a demanda das solicitações. Foram retirados cerca de 600mL de sangue de cada animal em frascos de vidro, que poderiam conter pérolas de vidro (para sangue desfibrinado), e anticoagulantes diversos. Todo material utilizado foi previamente esterilizado em autoclave. Os animais são divididos em dois grupos que são submetidos aos protocolos de sangria de forma alternada. São sangrados por grupo em média de 04 a 08 animais. Todos os animais são microchipados para controle individual evitando assim que o mesmo animal seja submetido ao procedimento de sangria com intervalo inferior a 21 dias. Para o presente estudo foram utilizados 30 animais, machos adultos, com idade variando entre 4 e 6 anos, incluídos nos grupos de sangria e divididos em dois grupos de 15 animais. Foram descartados 04 animais que já se encontram no grupo mais ainda não são submetidos ao protocolo de sangria por terem menos de dois anos de idade. Para a realização dos hemogramas o sangue foi coletado dos grupos na semana anterior ao procedimento de sangria e 12 horas após o procedimento de sangria. Foram utilizados tubos com capacidade volumétrica de 5mL, estéreis e com anticoagulante (EDTA), padrão para hemograma e comerciais. Seringas estéreis e descartáveis de 10mL e agulhas estéreis e descartáveis de calibre 40x12. Após a coleta do sangue ele foi devidamente acondicionado e enviado para o laboratório de Controle de Qualidade do CECAL, num prazo máximo de 2 horas e processado no mesmo dia da coleta. Foram utilizados para a realização do sangue analise hematológica automática e contagem de leucometria específica manual por meio de esfregaço sanguíneo. Para a realização do hemograma foi utilizado o equipamento VET-ABC^® que possui um sistema hidráulico completamente comandado por computador principal através de uma interface microprocessada. Este sistema hidráulico é responsável por aspirar um volume conhecido da amostra, dispensar diluentes de contagem e lise, lavar as agulhas de amostragem entre as diferentes operações e drenar volumes pré-estabelecidos das amostras diluídas para os respectivos blocos de contagem. O equipamento utiliza métodos baseados na variação da impedância gerada pela passagem das células diluídas em um diluente eletrolítico através de micro orifícios calibrados (parâmetros de contagem das células e determinação do hematócrito), determinação espectrofotométrica após lise das células vermelhas com diluente contendo ferricianeto e cianeto de potássio (parâmetros de dosagem de hemoglobina). O equipamento requer 12 ml de sangue total e é capaz de realizar análises completas a uma taxa de 42-45 amostras por hora de funcionamento, e está programado para a análise hematológica automática de 10 espécies de animais, dentre elas, Ovinos . O VET-ABC^® analisa a cada ensaio os seguintes parâmetros a partir de 12 ml de sangue total: Contagem de glóbulos brancos (WBC), contagem de glóbulos vermelhos (RBC), contagem de plaquetas (PLT), dosagem de hemoglobina (HGB), determinação do hematócrito (HCT), e calcula o volume celular médio (MCV), a hemoglobina corpuscular média (MCH) e a concentração média de hemoglobina corpuscular (MCHC). São utilizados controles com altos, normais e baixos valores (Minotrol) na rotina diária do equipamento como controle de qualidade interno. Os valores normais preconizados para cada espécie animal são inseridos no equipamento através de cartões inteligentes antes da análise do material. Estes cartões guardam as informações específicas sobre cada espécie animal e servem de referência na interpretação e emissão do resultado final. Estes valores são passíveis de ajuste em função de características específicas dos animais analisados no laboratório e muito úteis no caso de situações especiais ligadas a sublinhagens de animais, permitindo criar perfil compatível com idade do animal ou para projetos onde os parâmetros hematológicos estejam alterados⁶. Os dados coletados encontram-se condensados na tabela I e II. Os resultados foram analisados estatisticamente, considerando a média aritmética, o desvio-padrão e a correlação de variância dos dados contidos nas tabelas.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

De acordo com as tabelas I e II, os valores hematimétricos encontrados encontravam-se dentro do preconizado pela literatura consultada^1,2,3. Mesmo após o procedimento de sangria, não se evidenciou uma alteração significativa dos parâmetros sanguíneos em relação ao exame realizado pré-sangria, conforme evidenciado na tabela II. Estes resultados são importantes, pois além de monitorarem o estado sanitário dos animais, poderia evidenciar uma condição patologia associada ao procedimento de sangria e que contrariaria as normas institucionais e éticas do uso de animais^4,5. Os dados estatísticos no entanto evidenciaram na dosagem de hemoglobina e no hematócrito uma diminuição em relação ao exame pré-sangria, o que esta de acordo com a literatura que informa serem estes os resultados mais sensíveis em relação a perdas sanguíneas, o que acontece efetivamente no nosso protocolo, porem sem caracterizar um estado patológico e ainda assim se encontrando dentro da faixa de normalidade preconizada^1,2,3,4,5 . Estes resultados são importantes pois confirmam que o trabalho preconizado dentro do Pavilhão de Animais de Médio e Grande Porte, se encontra dentro das normas institucionais, obedecendo o que tange a ética e o bem-estar animal.

Tabela I –  Perfil Hematológico Individual  Pré-sangria, PAMGP/DPA/CECAL/FIOCRUZ, RJ, 2007

	1º Amostras  Hematologia - pré sangria
	Data: 18/04/2007
N° ANIMAL	RBC (milhões/mm3)	HGB (g/dL)	HCT (%)	MCV (fm3)	MCH (pg)	MCHC (g/dL)	WBC (mil/ mm3)	PLT (mil/ mm3)
1	7,09	8,6	23,3	33	12,2	37,1	3,8	292
2	8,15	10,5	26,2	32	12,9	40,2	6,0	280
3	8,92	11,4	32,3	36	12,8	35,2	6,3	448
4	10,15	12,6	36,2	36	12,5	34,9	5,4	551
5	10,99	13,7	39,6	36	12,4	34,5	6,6	208
6	14	17,6	47,0	34	12,5	37,4	9,1	129
7	13,63	17,2	45,0	33	12,6	38,3	5,0	358
8	12,16	16,5	39,5	32	13,6	41,8	7,2	490
9	11,17	13,4	37,9	34	12,0	35,2	4,8	479
10	11,17	14	41,4	37	12,5	33,7	5,0	465
11	10,98	14,5	34,6	32	13,2	41,9	9,5	442
12	10,89	13,2	38,5	35	12,2	34,4	4,6	448
13	12,04	14,3	42,3	35	11,9	33,8	5,6	337
Media	10,10	13,65	37,22	34,23	12,56	36,80	6,16	379,00
SD	3,33	2,57	6,83	1,74	0,48	2,94	1,37	123,86
CV	32,95%	18,85%	18,35%	5,08%	3,78%	7,99%	22,31%	32,68%

Tabela II –  Perfil Hematológico Individual  Pós-sangria, PAMGP/CECAL/FIOCRUZ, RJ, 2007

	2º Amostras  Hematologia - pós sangria
	Data: 26/04/2007
N° ANIMAL	RBC (milhões/mm3)	HGB (g/dL)	HCT (%)	MCV (fm3)	MCH (pg)	MCHC (g/dL)	WBC (mil/ mm3)	PLT (mil/ mm3)
1	9,52	11,3	35,1	37	11,9	32,3	6,9	617
2	10,69	12,9	39,2	37	12,0	32,8	9,3	208
3	8,42	10,4	28,6	34	12,3	36,4	6,5	463
4	10,75	13,4	39,4	37	12,4	34	5,8	523
5	11,02	13,7	37,3	34	12,5	36,8	6,3	453
6	10	13	33,0	33	13,0	39,4	5,8	411
7	10,12	12,4	34,5	34	12,3	36	10,6	147
8	10,57	13,1	38,4	36	12,4	34,2	5,4	541
9	9,82	12,5	36,8	37	12,7	33,9	5,1	382
10	9,62	11,9	33,9	35	12,3	35	6,4	355
11	9,9	13,1	32,4	33	13,3	40,5	9,7	441
12	11,54	14,3	38,6	33	12,4	37,1	6,5	374
13	9,87	11,9	34,0	34	12,1	35,1	4,3	631
Media	10,14	12,61	35,48	34,92	12,43	35,65	6,81	426,62
SD	0,79	1,04	3,18	1,66	0,39	2,41	1,97	141,05
CV	7,77%	8,27%	8,96%	4,74%	3,10%	6,76%	28,97%	33,06%